FACULTAD
DE INGENIERIA Y CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
Licenciatura
en Ciencias Biológicas
Orientación:
Ciencias
de la Salud
TRABAJO
FINAL
Células mesenquimales modificadas genéticamente para
sobreexpresar VEGF como
tratamiento de la Enfermedad Vascular
Periférica experimental en conejos.
Alumna:
Estefanía
María Nelda Rocha
Directora:
Dra.
Fernanda Daniela Olea
Co-director:
Dr.
Alberto Crottogini
Tutor:
Dr.
Gustavo Yannarelli
Año:
2013
Lugar
de realización:
Departamento
de Ciencias Fisiológicas, Farmacológicas y Bioquímicas.
Universidad
Favaloro.
RESUMEN
Introducción:
La enfermedad
vascular periférica (EVP) es un trastorno circulatorio que afecta el flujo
sanguíneo de las arterias de las extremidades inferiores. Su prevalencia está
estimada entre 3 y 12% de la población. Pese a los avances en
revascularización, enmuchos casos no hay tratamiento efectivo. Surge entonces
la necesidad de explorar nuevas estrategias angio-arteriogénicas que aumenten
el caudal sanguíneo y revitalicen el miembro afectado. Para lograr este efecto
los métodos más investigados son la terapia génica y el implante de células
madre. Respecto a la terapia génica, se ha demostrado que la inyección
intramuscular de un plásmido que contiene el gen angiogénico humano Vascular
Endotelial Growth Factor de 165 aminoácidos (pVEGF165) mejora la perfusión
tisular y la integridad del músculo esquelético en conejos con EVP
experimental. Una desventaja de esta terapia es que la expresión génica decae
rápidamente y, como consecuencia, los neovasos pierden estabilidad. Por otro
lado, las células mesenquimales de la grasa abdominal (ASCs) liberan factores
de crecimiento y citoquinas que actúan parácrinamente, induciendo proliferación
neovascular. Por lo tanto, hipotetizamos que la combinación de ambas terapias
(ASCs modificadas para que sobreexpresen VEGF) tendría mayores beneficios en un
modelo de EVP experimental.
Material
y Métodos: En 30
conejos se indujo EVP mediante extirpación de la arteria femoral superficial y
ligadura de la femoral profunda izquierdas. Al día siguiente cada animal fue
anestesiado y se le aplicó el tratamiento: 1×107 ASCs transfectadas con
pVEGF165 (Grupo ASCs-VEGF, n=10), 1×107 ASCs (Grupo ASCs, n=10) o PBS 2 ml
(Grupo placebo, n=10) en 10 inyecciones intramusculares. El día 30 se realizó
angiografía de miembros posteriores para calcular densidad de colaterales (DC).
Luego los animales fueron sacrificados y se tomaron muestras de los tejidos
isquémicos para estudios de histopatología (medición de lesiones musculares) e
inmunohistoquímica (cuantificación de capilares y arteriolas). En muestras
musculares de conejos adicionales sacrificados a diferentes tiempos se realizó
RT-qPCR para hVEGF y qPCR para SRY en hembras inyectadas con ASCs de macho.
Resultados:
La DC aumentó sólo en el grupo ASCs-VEGF respecto del
placebo (5,6±1,1 vs. 4,5±0,6 vasos/cm2, p<0,04, media±DS, ANOVA-Bonferroni).
La densidad capilar aumentó sólo en el grupo ASCs-VEGF respecto del placebo
(100,2±40,1 vs. 50,3±20,3 capilares/100 miocitos, p<0,05), mientras que la
densidad arteriolar fue superior al placebo (5,9±2,2) tanto en el grupo ASCs
(10,8±3,7, p<0,05) como en el grupo ASCs-VEGF (11,8±2,9 arteriolas/mm2,
p<0,05). El porcentaje de muestras musculares con lesiones isquémicas fue
menor tanto en ASCs (17%) como ASCs- VEGF (19%) en relación al grupo placebo
(40%, p<0,05; Fisher’s test). La expresión del pVEGF165 se detectó en gran
cantidad a los 7 días del tratamiento, mientras que a los 30 días fue casi
indetectable. El mismo patrón siguió la presencia de células en el músculo a
través de la detección del SRY (abundantes a los 7 días y escasa a los 30).
Conclusión: En conejos con EVP, las ASCs-VEGF mejoran la colateralización y la
densidad capilar más que las ASCs. Sin embargo, ambos tratamientos aumentan similarmente
la densidad arteriolar y protegen en igual medida contra las lesiones
musculares isquémicas.
Exposición del trabajo a cargo de la alumna y autora Estefanía Rocha.
Exposición del trabajo a cargo de la alumna y autora Estefanía Rocha.
Los jurados que evaluaron la presentación de izquierda a derecha:
Dr. Bruno Buchholz, Investigador del
Instituto de Fisiopatología Cardiovascular. Departamento de Patología. Facultad
de Medicina. UBA.
Dra. Verónica D'annunzio Universidad de Buenos Aires, Facultad de Medicina, Departamento de
Patología, Instituto de Fisiopatología Cardiovascular
Dr. Juan Carlos Calvo, Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas
y Naturales UBA e IBYME, CONICET
De
izquierda a derecha el Dr. Juan Carlos Calvo (miembro del jurado), la Dra.Daniela Olea
(Directora de Tesina), Estefanía Rocha (autora) la Dra. Verónica
D'annunzio (miembro del jurado) y el Dr. Bruno Buchholz (miembro del jurado).
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